Kidney Int ：肾小管生物钟调节功能障碍导致糖尿病患者肾糖异生增强和过重高血糖

背景及目的：在脾病患儿中都，心脏通过上升原大肠中都的重吸收和上调近端小管中都的丙酮酸来促进脾病高皮质醇的发生。然而，皮质醇低水平的慢性上升确实反过来造成了脾病脾病(DN)，这是脾病最情况严重的肝硬化之一，其特征是脾小球、小肠和心脏血管受损。虽然生物合成应激是脾病脾病发生和持续发展的主要因素，但在大多数脾病患儿中都，高皮质醇本身并才会造成了脾功能不全。这确实，合并症或状况、遗传或表型遗传的叠加确实是启动和/或加速的持续发展DN所需的。心率是一种密切相关的分子计时必要，它将线粒体、一个组织和控制系统的生物功能与24同一时间的状况周期该系统。局部心率涡轮机线粒体类型式和一个组织特有的生理，它们的失调与一系列疾病的发病和/或的持续发展有关。然而，脾病患儿心脏中都内在心率的病理表征主导作用仍不清楚。

原理：为了解决这个缺陷，我们用链苯甲盐酸佐霉菌作用于了身线粒体(cKOp食肉动物模型)或小肠(cKOt食肉动物模型)中都缺乏昼夜生理mRNA适度因子BMAL1的食肉动物模型患I型式脾病。

食肉动物模型模型式化学合成：8周龄Bmal1lox/lox/Nphs2-RTTA/LC1食肉动物模型(cKOp食肉动物模型)或8周龄Bmal1lox/lox/Pax8-RTTA/LC1食肉动物模型(cKOt食肉动物模型)经DOX(饮水中都2 mg/ml)处理事件2都于，Bmal1(ARNTL)性状失活。他们的非常少(Bmal1lox/lox食肉动物模型)给与相同的DOX化疗。在DOX化疗结束一都于，通过胸腔施打链苯甲盐酸佐霉菌(STZ，50 mg/kg运动量，每日5天)作用于I型式脾病。溶媒处理事件的食肉动物模型给与PBS的溶媒施打。所有实验室之外在最后一次施打STZ或溶媒8都于开展。在所有实验室中都，从ZT9处死的食肉动物模型身上采集一个组织和体液(ZT-Zeitgeber星期各单位；ZT0是点亮星期，ZT12是关灯星期)。

生物合成蔓：食肉动物模型被饲养在个体生物合成蔓子中都(Tecniplast，意大利)。在4天的适应期后开展24同一时间的大肠液得来。

血浆和大肠液生化测量：用Vaudois中都心医院临床的实验室室(LCC)测量大肠和血浆Na+、K+、Ca2+、Mg2+、磷盐酸盐、肌酐、、大肠盐酸和大肠素浓度及渗透压。用盐酸碱容(Metrohm)测量大肠液pH值。使用EPOC体液分析方法容(西门子医疗)测量动-导管融合血的体液pH值和血气。大肠铵测量换用Berthelot法。大肠可滴定盐酸测量换用Chan25原理。换用放射免疫法(DPC)测量血浆GABA低水平。用Mercodia公司的试剂盒测量血浆皮质醇。

耐量试验车(GTT)：禁食15同一时间后，给空白非常少和cKOt食肉动物模型胸腔施打(1g/kg运动量)。分别于施打此前(t=0)、施打后15、30、60、90、120、180min，用皮质醇校正容测量皮质醇。

皮质醇耐量试验车(ITT)：禁食4h后，给非常少和cKOt食肉动物模型胸腔施打0.5U/kg运动量的重组人皮质醇(人重组皮质醇，Sigma)。分别于皮质醇施打此前(t=0)、皮质醇施打后15、30、45、60、90、120、150、180min测量皮质醇。如果皮质醇降至2 mm不限，则通过胸腔施打30毫克拯救食肉动物模型，并将其排除在分析方法都是。

RNA测序技术：RNA-SEQ按照Ansermet等人在6.Mus Musculus中都的描述开展。使用GRCm38.92性状脚注。使用TMM消去对性状计算开展定标，并使用LIMMA R包27中都的“CPM”函数将其对数转换为每百万计算(CPM)。算出了KO和Ctrl食肉动物在处理事件方式(PBS)和处理事件(STZ)条件下的关联理解以及之间的相互主导作用。对于这三种比较中都的每一种，自由选择FDR

结果：在患脾病的cKOp和cKOt食肉动物模型中都，心率功能障碍与脾病脾病的发生很难相关性。然而，与链苯甲盐酸佐霉菌化疗的非常少相比，患脾病的cKOt食肉动物模型表现出加高皮质醇过重，大肠中都排泄上升，多大肠上升，心脏肥大不够明显。mRNA和蛋白质理解分析方法说明了，与脾病非常少食肉动物模型相比，cKOt脾病食肉动物模型心脏中都的丙酮酸途径显著强化。CKOt脾病食肉动物模型的mRNA分析方法和功能分析方法确定了直接或间接影响丙酮酸途径的多种必要的叠加。

结论：我们证明了内在小肠心率功能障碍可通过强化脾近端小管的丙酮酸而过重脾病高皮质醇，全面性强调了心率适度在脾病患儿中都的更为重要。

原文出处：

Ansermet C， Centeno G， Bignon Y，et al.Dysfunction of the circadian clock in the kidney tubule leads to enhanced kidney gluconeogenesis and exacerbated hyperglycemia in diabetes.Kidney Int 2021 Nov 24